Основные ссылки
|
МУК 4.1.256-96 Спектрофотометрическое определение концентраций стрептодеказы в воздухе рабочей зоны.
Государственное
санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Спектрофотометрическое
определение концентраций стрептодеказы в воздухе рабочей зоны
МУК 4.1.256-96
Минздрав
России
Москва
2000
1. Методические указания по
измерению концентрации вредных веществ в воздухе рабочей зоны (выпуск 30)
разработаны с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций
вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочно
безопасным уровням воздействия (ОБУВ) - санитарно-гигиеническим нормативам и
являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.
2. Методические указания по
измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны утверждены и. о.
Председателя Госкомсанэпиднадзора России - заместителем Главного
государственного санитарного врача Российской Федерации 8 июня 1996 г.
3. Введены впервые.
4. Включенные в данный
выпуск 74 методики контроля вредных веществ в воздухе рабочей зоны разработаны
и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТа
12.1.005-88 ССБТ "Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические
требования", ГОСТа
12.1.016-79 ССБТ "Воздух рабочей зоны. Требования к методикам
измерения концентраций вредных веществ" и ГОСТа Р
1.5-92 п. 7.3.
Методические указания
одобрены на совместном заседании группы Главного эксперта Федеральной комиссии
по санитарно-гигиеническому нормированию "Лабораторно-инструментальное
дело и метрологическое обеспечение" и методбюро п/секции
"Промышленно-санитарная химия" Проблемной комиссии "Научные
основы гигиены труда и профпатологии".
Ответственные исполнители: Г. А. Дьякова, C.
И. Муравьева
Исполнители: Г. А. Дьякова,
Н. С. Горячев. Л. Г. Макеева, Г. В. Муравьева, Е. М. Малинина, Е. В. Грыжина,
Е. Н. Грицун.
УТВЕРЖДЕНО
И. о. Председателя
Госкомсанэпиднадзора
России - заместителем
Главного
государственного санитарного
врача
Российской Федерации
Г.Г. Онищенко
8 июня 1996 г.
МУК 4.1.256-96
Дата введения: с момента утверждения
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Спектрофотометрическое
определение концентраций стрептодеказы в воздухе рабочей зоны
Стрептодеказа М.м.
70000-130000
п -
100 мол, % звеньев полиглюкина (ПГ); у -
24 мол. % окисленных звеньев ПГ; p -
мол. % NH2 - групп стрептокиназы, модифицированной ПГ.
Белый или с желтоватым
оттенком лиофилизированный порошок или пористая масса, уплотненная в таблетку.
Легко растворим в воде, растворе натрия хлорида 0,9 % изотонического (ГФ, х,
стр. 756).
В воздухе находится в виде
аэрозоля.
Проявляет сенсибилизирующие
и аллергические свойства.
ПДК в воздухе - 1 мг/м3.
Характеристика
метода
Методика основана на
использовании высокоспецифических антител к стрептодеказе, проведении реакции
антиген-антитело с антителами, меченными ферментом-маркером пероксидазой, и
спектрофотометрическом тестировании активности пероксидазы при длине волны 492
нм.
Отбор проб проводят с
концентрированном на фильтр.
Нижний предел измерения
концентрации в анализируемом растворе - 0,03 мкг.
Диапазон изменяемых
концентраций - от 0,12 до 1,2 мг/м3.
Нижний предел измерения в
воздухе - 0,12 мг/м3 (при отборе 50 л воздуха).
Измерению не мешают белки
(бычий сывороточный альбумин, яичный альбумин), ферменты (липаза Pen. solitum,
L - аспарагиназа Е. coli).
Суммарная погрешность не
превышает ± 25 %.
Время выполнения измерений,
включая отбор проб - 4 ч.
Приборы,
аппаратура, посуда
Аспирационное устройство
|
|
Весы лабораторные 2-го класса точности, тип
ВЛР-200: погрешность взвешивания по шкале ± 0,15 мг
|
ГОСТ
24104-88
|
Иономер универсальный ЭВ-74: погрешность измерений
±
0,005
|
ГОСТ
22261-82
|
Дозаторы пипеточные
|
ТУ 64-1-3329-81
|
Колбы мерные 2-25-2, 2-50-2, 2-500-2, 2-1000-2,
2-го класса точности
|
ГОСТ
1770-74
|
Пипетки 6-2-5, 6-5-10
|
ГОСТ
20292-74
|
Планшеты для иммуноферментного анализа
|
ТУ 64-2-278-78
|
Считыватель АКИ-Ц-0,1
|
ТУ 64-16-17-89
|
Стаканы химические, вместимостью 0,05, 0,15, 0,2 и
1 л
|
ГОСТ 19980-80
|
Термостат суховоздушный тип ТС-8М
|
ТУ 64-1-1382-72
|
Фильтр АФА-ВП-20 с фильтродержателем
|
ТУ 957186-76
|
Холодильник бытовой
|
ГОСТ
26678-85
|
Цилиндр мерный 2-100
|
ГОСТ
1770-74
|
Реактивы,
растворы, материалы
Лимонная кислота моногидрат, ч. д. а. 0,1 М
раствор
|
ГОСТ
3652-69
|
Натрий фосфорнокислый однозамещенный, двухводный
|
ГОСТ
245-76
|
Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный, ч. д. а.
|
ГОСТ
11773-76
|
Натрий хлорид, (ГФ, X, 426) 0,85; 2,92 %
|
|
Приготовление 0,1 моль/л
фосфатного буферного раствора рН 7,2 ± 0,1. 35,5 г натрия
фосфорнокислого двузамещенного растворяют в 1000 мл дистиллированной воды в
мерной колбе, вместимостью 1000 мл.
4 г натрия фосфорнокислого
однозамещенного растворяют в 250 мл воды в мерной колбе, вместимостью 250 мл.
1000 мл раствора натрия
фосфорнокислого двузамещенного и 250 мл раствора натрия фосфорнокислого
однозамещенного смешивают в стакане, вместимостью 2000 мл.
Раствор хранится в течение 2
месяцев в холодильнике.
Приготовление буфера "А". 1000 мл фосфатного буферного раствора рН 7,2
смешивают с 8,47 г хлористого натрия. Раствор хранят в холодильнике в течение 2
месяцев.
Твин-20 "Серва",
ФРГ.
Приготовление буфера "В". К 1000 мл раствора фосфатного буфера рН 7,2 ± 0,1 прибавляют 29,2 г
хлористого натрия и 1 мл твина-20. Раствор хранят в холодильнике в течение 2
месяцев.
Приготовление 0,1 моль/л
фосфатно-цитратного буферного раствора рН 5,0 ± 0,1. В мерную колбу,
вместимостью 1000 мл, вносят 7,3 г лимонной кислоты (моногидрат) и 9,47 г
натрия фосфорнокислого однозамещенного безводного и доводят раствор до метки
дистиллированной водой при перемешивании. Раствор хранят при температуре - 10 °С в течение 6 месяцев.
O-фенилендиамин, х. ч.,
0,04 %-ный раствор
|
ТУ 6-09-5880-69
|
Приготовление
0,04 % раствора о-фенилендиамина. Навеску 10 г о-фенилендиамина растворяют в 24 мл
фосфатноцитратного буфера в стакане, вместимостью 50 мл. Раствор готовят
непосредственно перед измерением.
Перекись водорода
|
ГОСТ 10929-76
|
Приготовление
раствора субстратной смеси. К 24 мл раствора о-фенилендиамина прибавляют дозатором, вместимостью 20
мкл, 14 мкл концентрированной перекиси водорода. Смесь готовят непосредственно
перед измерениями.
Стрептодеказа раствора с = 0,6 мкг/мл, С = 0,12 мкг/мл
|
ФС 42-2471-87
|
Приготовление основного
раствора стрептодеказы с концентрацией 0,6 мкг/мл. Точную навеску 25 мг (7,2 %
белка) стрептодеказы растворяют в 6 мл дистиллированной воды. Массовая
концентрация стрептодеказы в полученном растворе составляет 0,30 мг/мл. Из
полученного раствора отбирают 1 мл дозатором на 1 мл и вносят в мерную колбу,
вместимостью 500 мл. Объем доводят до метки дистиллированной водой.
Используют
свежеприготовленный раствор.
Приготовление раствора
стрептодеказы с концентрацией 0,12 мкг/мл. 5 мл основного раствора стрептодеказы
пипеткой, вместимостью 5 мл, переносят в мерную колбу, вместимостью 25 мл.
Объем доводят до метки буфером "А". Используют свежеприготовленный
раствор.
Серная кислота, х. ч., концентрированная 4М
раствор
|
ГОСТ 4204-77
|
Приготовление 4 М раствора
серной кислоты. К 8,5 дистиллированной воды, используя пипетку, вместимостью 1 мл,
добавляют 0,5 мл концентрированной серной кислоты. Раствор хранят при комнатной
температуре.
Антисыворотка к стрептодеказе,
ВНИТИАФ
Приготовление раствора антисыворотки. Содержимое флакона с лиофилизированной
антисывороткой к стрептодеказе растворяют в 5 мл буфера "В", используя пипетку, вместимостью 5 мл.
Далее из полученного
раствора отбирают 0,5 мл дозатором на 1 мл и переносят в мерную колбу, вместимостью
500 мл, доводят объем до метки буфером "В". Раствор готовят
непосредственно перед употреблением.
Подготовка сенсибилизированного планшета. Раствор стрептодеказы с
концентрацией 0,12 мкг/мл заливают дозатором, вместимостью 0,2 мл по 0,2 мл во
все лунки (кроме А1) полистиролового планшета для ИФА. Планшет закрывают
крышкой и выдерживают 18 часов в холодильнике. Из лунок выливают раствор
стрептодеказы и промывают 4 раза буфером "В" с помощью
полуавтоматической промывалки.
Сенсибилизированный таким образом
планшет используют в анализе или запаивают в полиэтиленовый мешок и хранят в
холодильнике в течение 3 месяцев.
Антитела диагностические против
иммуноглобулинов кролика, меченные
пероксидазой, ВФС 42-8-ВС-85,
(антивидовой коньюгат)
Приготовление раствора антивидового конъюгата. Содержимое ампулы с
антивидовым конъюгатом растворяют в 20 мл буфера "В", используя
пипетку, вместимостью 10 мл. Раствор готовят непосредственно перед
употреблением.
Отбор пробы
воздуха
Воздух с объемным расходом 10
л/мин аспирируют через фильтр АФА-ВП-20, закрепленный в фильтродержателе. Для
измерения 1/2 ПДК достаточно отобрать 50л воздуха. Пробы хранят менее суток.
Подготовка к
выполнению измерений
Градуировочный растворы
готовят согласно таблице. Хранят в холодильнике не более 3 суток.
Таблица
Шкала
градуировочных растворов
№ стандартов
|
Основной р-р стрептодеказы, мл
|
Вода, мл
|
Концентрация стрептодеказы в градуировочном р-ре, мкг/мл
|
1
|
0,2
|
0,2
|
0,300
|
2
|
0,2
|
0,6
|
0,150
|
3
|
0,2
|
1,4
|
0,080
|
4
|
0,2
|
2,8
|
0,040
|
5
|
0,2
|
3,8
|
0,030
|
6
|
0,2
|
5,8
|
0,020
|
Проведение
анализа
1. Во все промытые, не
содержащие раствор лунки (кроме А1) предварительно сенсибилизированного планшета,
заливают с помощью дозатора на 0,1 мл по 0,1 мл раствора антисыворотки, затем в
лунки B1, C1 заливают по 0,1 мл буфера "В", в лунки 2-7 рядов А, В, С - по 0,1 мл
градуировочных растворов. Для каждого стандартного раствора отводят по 3 лунки.
Во всех лунках общий объем составляет 0,2 мл, лунка А1 остается пустой.
Планшет закрывают крышкой и
инкубируют 1,5 ч при температуре 37 °С.
2. Выливают содержимое
планшета и промывают его 4 раза буфером "В".
3. Во все лунки (кроме А1)
вносят по 0,2 мл раствора антивидового конъюгата, закрывают планшет крышкой и
инкубируют 1,5 ч при температуре 37 °С.
4. Четырехкратная промывка
по п. 2.
5. Проведение ферментативной
реакции.
В каждую лунку вносят
дозатором на 0,1 мл по 0,1 мл раствора с субстратной смесью. Инкубируют по
секундомеру 10 мин. Затем в той же последовательности в лунки вносят дозатором
на 0,2 мл по 0,075 мл раствора 4М серной кислоты для остановки реакции.
6. Для измерения оптической
плотности растворов в лунках планшет помещают в рамку считывателя АКИ.Ц.0,1.
Измерение проводят при длине волны 492 нм, причем в качестве раствора сравнения
используют раствор субстратной смеси в лунке А1.
Строят градуировочный
график. На масштабно-координатной бумаге по оси абсцисс откладывают концентрацию
стрептодеказы в градуировочных растворах в единицах концентрации (мкг/мл), а по
оси ординат - значение оптической плотности при длине волны 492 нм.
Градуировочный график строят одновременно с проведением измерений в пробах.
Проведение
измерения
После отбора пробы воздуха
фильтры АФА-ВП-20 помещают в стаканы, вместимостью 50 мл, и приливают 20 мл
буфера "А", периодически встряхивая, выдерживают в течение 10 мин.
Затем с помощью дозатора на 1 мл отбирают 1 мл раствора и переносят в мерную
колбу, вместимостью 50 мл, объем доводят до метки буфером "В".
Анализ проводят аналогично
процедуре при построении калибровочной зависимости.
Растворы могут храниться до
проведения анализа в течение 2 суток в холодильнике.
По градуировочному графику
на основании измерения значений оптической плотности в растворах проб
определяют соответствующие концентрации стрептодеказы в пробах (мкг/мл).
Расчет
концентрации
Концентрацию стрептодеказы (С) в воздухе (мг/м3)
вычисляют по формуле:
, где
а -
концентрация стрептодеказы в анализируемом растворе, мкг;
в -
общий объем анализируемого раствора, мл;
V -
объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л
(см. приложение 1).
К -
коэффициент десорбции вещества с фильтра, равный 0,85.
Методические указания разработаны ВНИИТИАФ, г. С.Петербург.
Приложение 1
Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температуре 20 °С и давление 760 мм рт. ст.)
Приведение объема воздуха к
стандартным условиям проводят по формуле:
, где
Vt - объем воздуха, отобранного
для анализа, л;
Р -
барометрическое давление, мм рт. ст. (760 мм рт. ст. = 101,33 кПа);
t° - температура воздуха в месте отбора пробы, °С.
Для удобства расчета Vст следует пользоваться таблицей коэффициентов (приложение 2). Для приведения
объема воздуха к температуре 20 °С и давлению 760 мм рт. ст. (101,33 кПа) надо
умножить Vt на
соответствующий коэффициент.
Приложение 2
Коэффициент К для приведения объема воздуха к стандартным
условиям
Давление Р, кПа/мм рт. ст.
|
°С
|
730
|
734
|
738
|
742
|
746
|
750
|
754
|
758
|
760
|
764
|
-30
|
1,1582
|
1,1646
|
1,1709
|
1,1772
|
1,1836
|
1,1899
|
1,1963
|
1,2026
|
1,2058
|
1,2122
|
-26
|
1,1393
|
1,1456
|
1,1519
|
1,1581
|
1,1644
|
1,1705
|
1,1768
|
1,1831
|
1,1862
|
1,1925
|
-22
|
1,1212
|
1,1274
|
1,1336
|
1,1396
|
1,1458
|
1,1519
|
1,1581
|
1,1643
|
1,1673
|
1,1735
|
-18
|
1,1036
|
1,1097
|
1,1158
|
1,1218
|
1,1278
|
1,1338
|
1,1399
|
1,1400
|
1,1490
|
1,1551
|
-14
|
1,0866
|
1,0926
|
1,0986
|
1,1045
|
1,1105
|
1,1164
|
1,1224
|
1,1284
|
1,1313
|
1,1373
|
-10
|
1,0701
|
1,0760
|
1,0819
|
1,0877
|
1,0986
|
1,0994
|
1,1053
|
1,1112
|
1,1141
|
1,1200
|
-6
|
1,0540
|
1,0599
|
1,0657
|
1,0714
|
1,0772
|
1,0829
|
1,0887
|
1,0945
|
1,0974
|
1,1032
|
-2
|
1,0385
|
1,0442
|
1,0499
|
1,0556
|
1,0613
|
1,0669
|
1,0726
|
1,0784
|
1,0812
|
1,0869
|
0
|
1,0309
|
1,0366
|
1,0423
|
1,0477
|
1,0535
|
1,0591
|
1,0648
|
1,0705
|
1,0733
|
1,0789
|
+2
|
1,0234
|
1,0291
|
1,0347
|
1,0402
|
1,0459
|
1,0514
|
1,0571
|
1,0627
|
1,0655
|
1,0712
|
+6
|
1,0087
|
1,0143
|
1,0198
|
1,0253
|
1,0309
|
1,0363
|
1,0419
|
1,0475
|
1,0502
|
1,0557
|
+10
|
0,9944
|
0,9999
|
1,0054
|
1,0108
|
1,0162
|
1,0216
|
1,0272
|
1,0326
|
1,0353
|
1,0407
|
+14
|
0,9806
|
0,9860
|
0,9914
|
0,9967
|
1,0027
|
1,0074
|
1,0128
|
1,0183
|
1,0209
|
1,0263
|
+18
|
0,9671
|
0,9725
|
0,9778
|
0,9880
|
0,9884
|
0,9936
|
0,9989
|
1,0043
|
1,0069
|
1,0122
|
+20
|
0,9605
|
0,9658
|
0,9711
|
0,9783
|
0,9816
|
0,9868
|
0,9921
|
0,9974
|
1,0000
|
1,0053
|
+22
|
0,9539
|
0,9592
|
0,9645
|
0,9696
|
0,9749
|
0,9800
|
0,9853
|
0,9906
|
0,9932
|
0,9985
|
+24
|
0,9475
|
0,9527
|
0,9579
|
0,9631
|
0,9683
|
0,9735
|
0,9787
|
0,9839
|
0,9865
|
0,9917
|
+26
|
0,9412
|
0,9464
|
0,9516
|
0,9566
|
0,9618
|
0,9669
|
0,9721
|
0,9773
|
0,9799
|
0,9851
|
+28
|
0,9349
|
0,9401
|
0,9453
|
0,9503
|
0,9655
|
0,9605
|
0,9657
|
0,9708
|
0,9734
|
0,9785
|
+30
|
0,9288
|
0,9339
|
0,9891
|
0,9440
|
0,9432
|
0,9542
|
0,9594
|
0,9645
|
0,9670
|
0,9723
|
+34
|
0,9167
|
0,9218
|
0,9268
|
0,9318
|
0,9368
|
0,9418
|
0,9468
|
0,9519
|
0,9544
|
0,9595
|
+38
|
0,9049
|
0,9099
|
0,9149
|
0,9198
|
0,9248
|
0,9297
|
0,9347
|
0,9397
|
0,9421
|
0,9471
|
Источник информации: https://internet-law.ru/stroyka/text/42287/
На эту страницу сайта можно сделать ссылку:
На правах рекламы:
|