ГОСУДАРСТВЕННОЕ
САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ
НОРМИРОВАНИЕ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ГОСУДАРСТВЕННЫЕ
САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ
ПРАВИЛА И НОРМАТИВЫ
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Метод микробиологического измерения
концентрации препарата ЭМ-1 «Байкал»
по одному из ведущих компонентов
(Lactobacillus casei-21)
в воздухе рабочей зоны
Методические
указания
МУК 4.2.1071-01
Минздрав России
Москва 2002
1. Разработаны к. м. н.
Сергеюк Н. П. (Научно-исследовательский центр «Экос»).
2. Утверждены и введены в
действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации -
Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября
2001 r.
3. Введены впервые.
СОДЕРЖАНИЕ
УТВЕРЖДАЮ
Главный государственный
санитарный врач Российской
Федерации - Первый
заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
20 сентября 2001 г.
МУК 4.2.1071-01
Дата
введения: с момента
утверждения
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Метод микробиологического измерения концентрации
препарата ЭМ-1 «Байкал» по одному из ведущих компонентов (Lactobacillus casei-21)
в воздухе рабочей зоны
Настоящие методические
указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного
анализа концентраций клеток штамма Lactobacillus casei-21, являющегося
ведущим компонентом консорциума микроорганизмов (препарат ЭМ-1 «Байкал») в
воздухе рабочей зоны в диапазоне концентрации от 100 до 50000 клеток в 1 м3
воздуха.
Методические указания разработаны
с целью обеспечения микробиологического контроля концентрации препарата «Байкал
ЭМ-1» по одному из ведущих компонентов Lactobacillus casei-21 в воздухе рабочей
зоны и производственных помещений и оценки соответствия уровня его содержания
гигиеническим нормативам на основе учета требований ГОСТ
12.1.005-88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические
требования», ГОСТ 8.563-96 «ГСИ. Методики выполнения измерений».
Методические указания
предназначены для центров госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий
биотехнологических предприятий, микробиологических лабораторий,
научно-исследовательских институтов, работающих в области гигиены окружающей
среды и аккредитованных в установленном порядке на право проведения
микробиологических исследований.
Семейство: Lactobacillaceae
Род: Lactobacillus
Вид: casei
Штамм: 21
На поверхности плотных
питательных сред образует мелкие круглые колонии. Глубинные колонии - вогнутые,
иногда с выростами. Форма клеток - палочки разной длины, образуют короткие и
длинные цепочки, неподвижные, неспорообразующие, грамположительные. Отмечена
также тенденция к образованию заметно искривленных (изогнутых) клеток.
Методика обеспечивает
выполнение измерений количества клеток Lactobacillus casei-21 в воздушной среде
в диапазоне концентраций от 100 до 50000 клеток в 1 м3 воздуха при
доверительной вероятности 0,95. ПДКр.з. 2000 кл/м3.
Метод основан на аспирации
из воздуха клеток Lactobacillus casei-21 на поверхность плотной питательной
среды и подсчете выросших колоний по типичным морфологическим признакам.
При выполнении измерений
применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.
5.1. Средства измерений,
вспомогательные устройства, материалы
Прибор для
бактериологического анализа воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова) ТУ
64-12791-77
Термостаты
электрические суховоздушные или водяные
Автоклав
электрический ГОСТ
9586-75
Бокс,
оборудованный бактерицидными лампами
Холодильник
бытовой
Весы
лабораторные, аналитические типа ВЛА-200
Микроскоп
биологический с иммерсионной системой типа «Биолам» Л-211
Лупа с
увеличением х 10 ГОСТ
25706-83
Чашки Петри
бактериологические плоскодонные, диаметром 100 мм
Пробирки
биологические, вместимостью 20 и 35 мл ГОСТ
10515-75
Пипетки
мерные на 1, 5 и 10 мл ГОСТ
10515-75
Колбы
конические, вместимостью 250 и 500 мл ГОСТ
1770-74
Секундомер ГОСТ
9586-75
Барометр ГОСТ
24696-79
Марля
медицинская ГОСТ
9412-77
Вата
медицинская гигроскопическая ГОСТ
25556-81
5.2. Реактивы, растворы
Агар
микробиологический ГОСТ
17206-96
Селективная
среда для молочно-кислых палочек Lactobacillus casei-21
Среда Рогозы
(состав питательной среды %):
дрожжевой
экстракт - 0,5; триптический гидролизат казеина - 1,0; твин-80 - 0,1; глюкоза -
2,0; натрий уксуснокислый - 2,5; лимоннокислый аммоний - 0,2; ледяная уксусная
кислота - 0,132; соль Б - (магний сернокислый - 11,5 г; марганец сернокислый -
2,86 г; железо сернокислое - 0,58 г; вода 100 мл) - 0,5; калий фосфорнокислый
однозамещенный - 0,6, рН среды 0,6;
вода водопроводная
- 100 мл;
агар-агар -
1,5.
Стерилизация при 3/4
атмосферы, 20 мин. После остывания раствора добавляют 9 мл этилового спирта для
подавления посторонней микрофлоры и разливают данный раствор асептично по 20 мл
в чашки Петри.
При выполнении измерений
концентрации клеток Lactobacillus casei-21 в воздушной среде
соблюдают:
· правила техники безопасности
при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ
12.1.005-88;
· правила электробезопасности
при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ
12.1.019-79 и инструкцию по эксплуатации прибора;
· требования, изложенные в
руководстве «Положение об организации работы по технике безопасности в
микробиологической промышленности (1980);
· положения «Инструкций по
устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в
микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности»
(1977).
К выполнению измерений и
обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным
образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в
области микробиологических исследований.
Процессы приготовления
растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях в
соответствии с ГОСТ
15150-69 при температуре воздуха (20 ± 5) °С, атмосферном давлении 630-800
мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80 %.
9.1. Условия отбора проб воздуха
Для определения
микроорганизма воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10
л/мин на поверхность плотной питательной среды. Время аспирации воздуха 20 мин.
Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом.
Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю
стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижный диск
устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее
крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо.
После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают
чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри
стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.
9.2. Выполнение анализа
Метод предполагает учет
количества типичных по морфологическим признакам колоний, выросших на 3-4 сутки
после посева воздуха. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний.
Селективную среду тщательно
перемешивают и разливают по 20 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной
поверхности. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при
температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки
используют для контроля воздуха.
После отбора проб воздуха
чашки Петри инкубируют в термостате при 36 °С, через 72 ч производят подсчет
выросших типичных колоний. При необходимости культуру подвергают
микроскопированию.
Расчет концентрации клеток в
1 м3 воздуха производят по формуле:
кл/м3, где
Х - концентрация клеток в
воздухе;
N - количество колоний,
выросших на чашке;
1000 - коэффициент
перерасчета на 1 м3 воздуха;
V - объем воздуха, л
(произведение скорости на время аспирации).
Препарат «Байкал ЭМ-1»
представляет собой консорциум микроорганизмов, в котором Lactobacillus casei-21 составляют 30 % от общего числа микроорганизмов. Streptococcus lactis - 30 %, бактерии фотосинтеза Phodopseudomonas
palistris - 30
%, сахаромицеты - Saccaromyces cerevisial - 10 %. Концентрацию
препарата «Байкал ЭМ-1» рассчитывают исходя из процентного отношения
микроорганизмов, входящих в его состав, по формуле:
A=100×N/d, где
А - концентрация консорциума
(кл/м3);
N - концентрация контрольного
микроорганизма (кл/м3);
d -
содержание контрольного микроорганизма в консорциуме (%).
Контрольным микроорганизмом
для данной методики является Lactobacillus casei-21.
Результаты измерении
оформляют протоколом по форме.
Протокол
№
количественного
микробиологического анализа препарата ЭМ-1 «Байкал» в воздухе рабочей зоны
Дата
проведения анализа
Место отбора
пробы
Название
лаборатории
Юридический
адрес организации
Результаты
микробиологического анализа
Шифр или № пробы
|
Определяемый микроорганизм
|
Концентрация, кл/м3
|
|
|
|
Ответственный исполнитель
Научный руководитель